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　　人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書

　　要包括試劑盒的檢測(cè)原理、樣本收集、處理及保存方法，以及實(shí)驗(yàn)所需的其他試劑和器材等信息?。

　　檢測(cè)原理

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)?。具體過(guò)程為：往預(yù)先包被降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度。

　　樣本收集、處理及保存方法

　　?血清?：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘(或1000×g離心10-20分鐘)將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離?？蓪⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘(或1000×g離心30分鐘)取上清。

　　?細(xì)胞上清液?：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘(或1000×g離心10分鐘)去除顆粒和聚合物?。

　　?組織勻漿?：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘(或按其他適當(dāng)條件離心)取上清。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融?。

　　實(shí)驗(yàn)所需的其他試劑和器材

　　酶標(biāo)儀(450nm)

　　高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　37℃恒溫箱

　　蒸餾水或去離子水

　　此外，試劑盒通常還包括酶標(biāo)板、酶標(biāo)抗體工作液、標(biāo)本稀釋液、濃縮洗滌液、標(biāo)準(zhǔn)品、底物工作液、終止液等組件，具體以實(shí)際購(gòu)買的試劑盒為準(zhǔn)。

　　請(qǐng)注意，不同品牌的試劑盒在具體操作步驟和試劑組成上可能有所不同，因此在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前應(yīng)詳細(xì)閱讀所購(gòu)試劑盒的說(shuō)明書，并嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作。