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人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書
發(fā)布時(shí)間:2025/2/7瀏覽:157次
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  人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書

  要包括試劑盒的檢測(cè)原理、樣本收集、處理及保存方法,以及實(shí)驗(yàn)所需的其他試劑和器材等信息?。

  檢測(cè)原理

  試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)?。具體過(guò)程為:往預(yù)先包被降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。

  樣本收集、處理及保存方法

  ?血清?:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘(或1000×g離心10-20分鐘)將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離??蓪⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  ?血漿?:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘(或1000×g離心30分鐘)取上清。

  ?細(xì)胞上清液?:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘(或1000×g離心10分鐘)去除顆粒和聚合物?。

  ?組織勻漿?:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘(或按其他適當(dāng)條件離心)取上清。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融?。

  實(shí)驗(yàn)所需的其他試劑和器材

  酶標(biāo)儀(450nm)

  高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  37℃恒溫箱

  蒸餾水或去離子水

  此外,試劑盒通常還包括酶標(biāo)板、酶標(biāo)抗體工作液、標(biāo)本稀釋液、濃縮洗滌液、標(biāo)準(zhǔn)品、底物工作液、終止液等組件,具體以實(shí)際購(gòu)買的試劑盒為準(zhǔn)。

  請(qǐng)注意,不同品牌的試劑盒在具體操作步驟和試劑組成上可能有所不同,因此在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前應(yīng)詳細(xì)閱讀所購(gòu)試劑盒的說(shuō)明書,并嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作。


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