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人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒實驗使用說明書
發(fā)布時間:2025/2/5瀏覽:86次
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  人Ⅰ型前膠原C末端肽(CCP)ELISA試劑盒實驗使用說明書

  實驗原理:

  本試劑盒應(yīng)用雙夾心法測定標(biāo)本中Ⅰ型前膠原C末端肽(CCP)水平。用純化的Ⅰ型前膠原C末端肽(CCP)捕獲包被微孔板,制成固相,往包被的微孔中依次加入Ⅰ型前膠原C末端肽(CCP),再與HRP標(biāo)記的檢測結(jié)合,形成-抗原-酶標(biāo)復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅰ型前膠原C末端肽(CCP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中Ⅰ型前膠原C末端肽(CCP)含量。

  樣品采集:

  收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本,儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標(biāo)本,將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存凝血因子IXELISA試劑盒

  自備物品:

  1 、 37 ℃ 恒溫箱

  2 、 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

  3 、 精密移液器及一次性吸頭

  4 、 蒸餾水

  5 、 一次性試管

  6 、 吸水紙

  人Ⅰ型前膠原C末端肽(CCP)ELISA試劑盒實驗使用說明書樣本處理及要求:

  1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

  2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

  3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

  4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

  5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

  6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

  7. 不能檢測含NaN3的樣品,NaN3辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

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